应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途）
ELISA检测概述
      ELISA酶联免疫试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

产品名称：大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA酶联免疫试剂盒
英文名称：Rat Orexin A Elisa Kit
货号：BH-H8704
规格：48T/96T
自备物品:
1.     酶标仪（450nm）
2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒温箱

 大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA酶联免疫试剂盒实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠肾小球内皮细胞完全培养基 100mL双甘氨二肽Gly-Gly质量规格：>99%,BR

PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]杂交瘤细胞CD25 PC 615.3 [PC 61; PC 61.5.3] hybridoma cell line CD25 DMEM+10% Hyclone 灭活血清重组人胰岛素Human recombinant Insulin质量规格：效价测定

IGFBP7 Protein Human 重组人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (His 标签)人胰岛素Human Insulin质量规格：测定用

HAN(人羊膜细胞) 5×106cells/瓶×2 雪旺细胞培养基SCM硝酸舍他康唑Sertaconazole nitrate质量规格：>98%,BR

肾小球内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)醋酸依降钙素 Elcatonin Acetate质量规格：BR
ME-180 人子宫颈表皮癌细胞4-(己氧基)苯(>98.0%(GC))4-(Hexyloxy)benzaldehyde质量规格：>98.0%(GC)

NCI-H292人肺癌细胞(结转移) NCI-H292 human lung cancer cells (lymph node metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4-庚氧基苯(>98.0%(GC)(T))4-Heptyloxybenzaldehyde质量规格：>98.0%(GC)(T)

KITLG Protein Mouse 重组小鼠 SCF / C-kit ligand 蛋白 (His 标签)4-差向-地美环素4-epi-Demeclocycline质量规格：美国进口

人葡萄膜色素细胞;UM 人气管平滑肌细胞完全培养基 100mL头孢喹诺Cefquinome质量规格：美国进口

急性T细胞白血病细胞;TALL-104头孢噻呋Ceftiofur质量规格：美国进口
大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA酶联免疫试剂盒PC-3M(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2氧化白藜芦醇质量规格：≥98%,BROxyresveratrol

HCAEC Pellet 人冠状动脉内皮细胞团块 > 1 mio.cells 口腔角质细胞生长添加物OKGS乙酰化白藜芦醇(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Acetyl-resveratrol

CL-0316A7r5(大鼠胸大动脉平滑肌细胞)5×106cells/瓶×2乙酰化白藜芦醇质量规格：≥98%,BRAcetyl-resveratrol

CD63 Others Rat 大鼠 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-L-丙氨酸质量规格：>98%,BRFmoc-Ala-OH

人海马趾星形胶质细胞总RNAHA-h NAFmoc-L-苯丙氨酸质量规格：0.98Fmoc-Phe-OH
IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亚苯(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene

人细胞;Hela2,3,6,7,10,11-六羟基三亚苯水合物(>95.0%(HPLC))质量规格：>95.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate

APOL1 Others Human 人 APOL1 / apolipoprotein L1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亚苯(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene

CL-0421RAG(小鼠肾腺癌细胞)5×106cells/瓶×22,3,6,7,10,11-六溴三亚苯(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene

人羊膜上皮细胞 双位点HC-KIT受体细胞株，DMF7细胞 BLO-11(小鼠骨骼成纤维细胞)1-溴-4-正辛基苯(>90.0%(GC))质量规格：>90.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene

操作步骤:
1.        标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.         温育：操作同3。
8.         洗涤：操作同5。
9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。